对虾养殖生态防控技术.pptx 87页VIP

对虾是全球性水产养殖种类，也是全球交易量最大的水产品（2011年，180万吨）我国是全球对虾养殖产量第一大国，2012年产量为165万吨，占全球养殖产量的40%Two diseases, WSS and HPNS, have caused huge economic loss in the global culturing shrimp中国其他对虾养殖国家● 自1988年WSS爆发以来，困扰全球对虾养殖产业● 1993-1998年，我国池塘养殖对虾发病率90%，发病池塘对虾死亡率接 近100%，年直接经济损失30多亿。我国对虾养殖产业陷入了严重的困 境，产量由世界第1跌至第6● 2008年，农业部新修订的《一、二、三类动物疫病病种名录》将白斑 综合症列为一类动物疫病●因病导致的对虾原初产品质量安全问题突出，如氯霉素事件（吨）（年）对虾白斑综合症（WSS）和肝胰腺坏死症(HPNS)是制约全球对虾养殖产业发展的最主要障碍肝胰腺坏死症（hepatopancreas necrosis syndrome, HPNS）—— 国际上称为早期死亡综合症（EMS）/ 急性肝胰腺坏死症（AHPNS）， 我国对虾养殖者称为“偷死病”，我们称为肝胰腺坏死症（HPNS）。—— 2013年全球养殖对虾减产23%，泰国减产54%，我国减产17%，广东减产30%。—— 养殖时间超过80天池塘的对虾HPNS发生率超过了80%，前中期发生HPNS单造 养殖产量只有300斤/亩。—— 年直接经济损失超过50亿元。 一、WSS生态防控技术（Ecological techniques for controlling WSS）（一）WSS环境调控防控技术（ Environmtental factors regulating techniques for controlling WSS ）1、理化胁迫的影响2、对虾先天性免疫对WSS发生的影响 3、环境调控防控技术（二）WSS生物防控技术(Biological control techniques for WSS) 一、WSS流行病学及防控的二个关键点WSS epidemiology conclude that WSSV latent infection turn to acute infection by environmental stress in shrimp individual and transmit in shrimp population by healthy shrimp eat dead shrimp with WSSV不携带WSSV对虾个体病毒潜伏感染对虾个体个体发生阶段：环境胁迫诱发潜伏感染转为急性感染关键控制点1：调控环境阻止病毒潜伏感染转为急性感染WSSV致死对虾个体关键控制点2：消除健康对虾摄食死亡对虾的生态位，切断疾病的传播途径群体爆发流行阶段：摄食死虾导致疾病传播与爆发对虾种群崩溃 WSS导致养殖对虾种群崩溃的主要原因：The root reasons of WSS outbreak in shrimp population—— 养殖生态系统种群单一，缺乏与健康对虾摄食死虾 的优势竞争者；(only shrimp population, without competitor with healthy shrimp )——诱发WSSV潜伏感染转为急性感染的环境因子。(We need to understanding environmental factors that induce WSSV latent Infection turning to acute infection in individual shrimp ) （一）WSS在养殖对虾个体中发生的环境基础与防控技术1、理化胁迫的影响 2、对虾先天性免疫对WSS发生的影响 3、环境调控防控技术 Y=421.894-28.448X1-1.086X 2-1.44×10-3X 3-1.965X 4式中Y为凡纳滨对虾的平均存活时间（h），X1为pH，X2为NO2--N的浓度（mg·L-1），X3为WSSV的量（copies），X4为NH4+-N的浓度（mg·L-1）。 养殖水体理化因子与病毒数量和对虾存活时间的关系多种水体理化因子对感染WSSV凡纳滨对虾影响斑节对虾杆状病毒(MBV)数量与主要水体理化因子的关系Y= -12.089X1+1.216X2+2.734X3+0.258X4式中Y=MBV在斑节对虾体内的相对数量; X1=抵抗力;X2=对虾养殖水体的盐度(0/00); X3=对虾养殖水体氨态氮浓度(ug/L); X4=对虾养殖水体亚硝酸氮浓度(ug/L)—— 对虾TOLL和IMD途径调控白斑综合症病毒（WSSV）复制 LvDorsal and LvLvRelish regulate WSSV replication —— 内质网胁迫的非折叠蛋白反应途径与白斑综合症复制的关系 Unfolded protein response (UPR) regulate WSSV replication—— 对虾抗WSSV途径 L. vannamei anti-WSSV pathway1、在对虾先天性免疫途径调控WSSV复制（1）对虾 TLR和IMD途径调控AMP表达鉴定了对虾TLR和IMD信号转导通路的关键基因；阐明了TLR和IMD途径调控抗菌肽表达。InfectionLvSPZ1-3PGRP-LCLvTLR1-3LvPelleLvIMDMyD88FADDLvTRAF6LvIKKsTube降解降解LvDorsalCactusLvRelishAMPs AMPs —— WSSV 利用 TLR途径促进病毒基因表达 WSSV utilizing NF-κB activation to favor its replications 发现对虾TLR信号转导途径可以促进病毒基因表达 WSSV InfectionLvPelleMyD88LvTRAF6WSSV449:Tube like proteinTubeLvDorsalViral gene including WSSV069 WSSV303 and WSSV371Wang PH，etc. Dev Comp Immunol. 2011 Jan;35(1):105-14. Huang XD, etc. Dev Comp Immunol. 2010 Feb;34(2):107-13.Huang XD, etc. Fish Shellfish Immunol. 2009 Aug;27(2):230-8.Wang PH, etc. Mol Immunol. 2009 May;46(8-9):1897-904Yang LS, etc. Mol Immunol. 2007 Mar;44(8):1999-2008.WSSV抑制了cactus-dorsal负调控途径WSSV的复制依赖对虾NF-kB活性Litopenaeus vannamei NF-κB is required for WSSV replication2、UPR pathways regulated WSSV replicationRandal J. et al. 2002（1）UPR XBP1途径及其对WSSV基因表达的调控Fig.1 凡纳滨XBP1 mRNA特征分析。(A) XBP1 mRNA的二级结构. (B) DTT刺激和热激引起XBP1 mRNA的切割. (C) XBP1 mRNA切割位点分析. 方框之内的序列为预测切割位点，AS1和AS2为两种实际切割位点. (D) 切割之后XBP1（XBP1s）的编码区的变化。（1）UPR XBP1途径及其对WSSV基因表达的调控Fig.2 环境胁迫对IRE1-XBP1 通路的影响。（A）热激引起的LvXBP1 mRNA切割。（B）WSSV感染引起的LvXBP1 mRNA切割。Fig.3 LvXBP1s对非折叠蛋白反应效应基因Bip的激活作用。（A）报告基因结构示意图。（B）LvXBP1上调LvBip的表达。LvXBP1s以UPRE序列依赖的方式激活wsv083Yi-Hong Chen， 2012，Developmental and Comparative Immunology（2）UPR ATF4途径及其调控WSSV基因表达LvATF4以ATF/CRE序列依赖的方式激活wsv023 WSSV与宿主相互作用——UPR BRLZ转录因子参与WSSV基因转录调控DsLvATF4 treatmentedDsLvXBP1 treatmented通过RNAi 分别敲低LvATF4和LvXBP1后进行WSSV攻毒实验。与对照组相比，dsLvATF4或是dsLvXBP1干扰组死亡率明显降低。Yi-Hong Chen，Developmental and Comparative Immunology. 201224h48h72hGFPPBSATF4（A）wsv023 48小时干扰效果（B）wsv023 RNAi 攻毒死亡率统计 3、对虾抗WSSV途径（1）宿主-病毒 LvCTL1 (lectin)-WSSV Far-WesternLvCTL1NCPull-Dwon 点杂交经鉴定的囊膜蛋白Fig 8. 鉴定若干与LvCTL1与相互作用的WSSV囊膜蛋白Fig 9. WSSV感染试验中，重组LvCTL1对L. vannamei具有保护作用Zhi-Ying Zhao, Fish and Shellfish Immunology.2007Zhi-Ying Zhao, Journal of Virology. 20092、免疫信号通路-RNAiFig 6. L. vannamei 体内的RNAi有效且具有特异性Yue Wu，Aquaculture. 2007Fig7. WSSV攻毒实验中，针对病毒的基因的siRNA对凡纳滨虾具有保护作用LvDicer2LvTRBP1LvAgo2Yi-Hong Chen， 2011，Developmental and Comparative ImmunologyYi-Hong Chen， 2012，Fish and Shellfish ImmunityLvArs2与LvPasha、LvDicer2相互作用LvArs2siRNAmiRNAsiRISC/siRLCLvPasha L。 vannamei siRISC复合物亚基间相互作用LvSVCs启动子LvDicer2上调LvSVCs的表达 对虾可能具有类似脊椎动物的干扰素诱导抗病毒途径3、对虾核酸诱导抗病毒免疫 4、理化因子调控防控对虾病毒病个体发生建立了测水调水理化因子指标体系 测定指标正常范围必须采取措施的阈值测定周期pH8.2-8.8﹤8 或﹥9或日波动0.52次/天DO3-6﹤32次/天NH4+-N0-0.1﹥0. 151次/天NO2-N0-0.1﹥0.21次/天H2S0-0.01﹥0.0151次/天余氯0﹥0.11次/5天盐度按虾种和季节定1次/5天透明度30-50﹥60或﹤201次/3天总碱度80-160﹤601次/7天总硬度80-120﹤601次/7天弧菌0-500﹥ 3000个/ml1次/5天总菌0-1000﹥10000个/ml1次/5天总氮1次/5天总磷100-300ppm﹥300或﹤501次/5天可溶性钙20-50﹥100或﹤101次/5天白班病毒0﹥100个/mg组织1次/10天1）高位池对虾养殖模式中的应用高位虾池高位池对虾养殖模式病害控制技术集成水质调控技术高效环保饲料　凡纳滨对虾每造平均单产达9吨/公顷，最高达75吨/公顷；　斑节对虾每造平均单产达6吨/公顷，最高达10.7吨/公顷。2）地膜对虾养殖模式地膜虾池 地膜池对虾养殖模式病害控制技术集成水质调控技术高效环保饲料●　传统虾池改造●　管理方便　凡纳滨对虾每造平均单产达8吨/公顷，最高达30吨/公顷；　斑节对虾每造平均单产达6吨/公顷，最高达10吨/公顷。 3）低盐度对虾养殖模式 低盐度虾池低盐度对虾养殖模式病害控制技术集成水质调控技术高效环保饲料—— 利用了对虾广盐性—— 切断WSSV部分的水平传播途径—— 减少了病毒病暴发的风险 （二）对虾WSS生物防控基础与技术 1、对虾WSS生物防控基础（1）健康对虾摄食死亡对虾是WSS传播的主要途径（2）在对虾养殖生态系统中，引入鱼类作为摄食死亡对虾优势竞争者，阻断健康对虾摄食死亡对虾，切断WSS的传播途径（3）根据摄食能力、摄食方式、活动能力和生态适应性，筛选出18种鱼类，开展鱼类对健康对虾、患病对虾和死亡对虾摄食能力、摄食选择性等生物防控关键参数的研究 Mathematical models for WSS transmission and the biocontrol of WSS in a shrimp population in a pond（4）揭示了凡纳滨对虾规格与感染WSSV死亡的时间关系（5）揭示了WSS在养殖凡纳滨对虾种群中的传播速度（6）建立了对虾WSS生物防控数学模型确定了用于生物防控的鱼类及规格、数量等技术参数（1）对虾WSS草鱼生物防控技术(盐度8以下) Biological control of WSS by grass carp（2）对虾WSS革胡子鲶生物防控技术(盐度6以下) Biocontrol of WSS by claris catfish （3）对虾WSS草鱼和革胡子鲶联合生物防控技术(盐度6以下) Combined biological treatment of WSS by grass carp and claris catfish （4）对虾WSS美国红鱼生物防控技术(所有盐度) Biocontrol of WSS by red drum（5）对虾WSS军曹鱼生物防控技术(盐度15以上) Biocontrol of WSSV by cobia （6）日本囊对虾WSS石斑鱼防控技术(盐度13以上) Biocontrol of by groupers（7）对虾WSS罗非鱼生物防控技术(盐度20以下) Biocontrol of WSSV by tilapia传统养殖模式生态防控模式举例：对虾WSS革胡子鲶生物防控技术，在一个有110口池塘的养殖场应用，养殖成功率100%，产量提高2-5倍2、建立了7套适合不同盐度和地区的生物防控技术 对虾病毒病草鱼生物防控技术 ① 适合盐度6以下养殖区；② 适合对虾苗种密度低于10万尾/亩；③ 对虾苗种养殖20～30天，每亩投放30～60尾，每尾1kg左右的草鱼。④ 比照对虾养殖的正常管理方法，培好水后，投放1.0cm左右的虾苗，每亩10万尾以下。由于草鱼在盐度大于6的水体中摄食能力较弱，所以选用草鱼的养殖水体的盐度在6以下范围内。如果养殖水体的盐度大于7.5，可用添加淡水的方法降低盐度，将盐度控制在上述范围内。适时投放草鱼。对虾养殖到20～30日左右，对虾病害暴发前投放草鱼。投放的草鱼数量不能少于30尾/亩，每尾1kg以上，并可根据放养虾苗的密度适当增加，但不能超过60尾/亩。 To determine the capacity of fish in controlling WSS, we performed the experiments in four sizes of shrimps (1.3 g, 2.5 g, 5.0 g, 7.8 g). We released one 1-kg grass carp with 750 healthy shrimps in 10 m2 tank. In this setting, we released different number of infected shrimps (see Exp. Table 4). Stars (*) represent the number of infected shrimps successfully controlled by one 1-kg grass carp while clear circles (o) represent the number of infected shrimps that failed to be controlled by one 1-kg grass carp. Based on the model 3, we simulated to determine the threshold (red line) of the number of infected shrimps controlled by one 1-kg grass carp. The red line is simulated highest value of one 1-kg fish that can control the number of infected shrimps with different weights of shrimps. 白斑综合症在我国养殖对虾发病率由90%下降到5%以下，基本消除了对虾白斑综合症对我国对虾养殖业的威胁。中国对虾养殖产量（1991-2012）环境调控防控与生物防控集成技术应用期环境调控防控技术应用期 爆发流行期 二、肝胰腺坏死症病因分析与生态防控技术Ecological control techniques for hepatopancreas necrosis sydrome （一）肝胰腺坏死症病因（二）肝胰腺坏死症生态防控技术（三）对虾养殖容纳量探讨（1） 对虾肝胰腺坏死症组织病理分析正常肝胰腺肝胰腺坏死症（2）对虾样品采集和细菌分离 分别在中国广东省番禺、珠海、中山、江门、阳江、茂名、湛江、惠州、汕尾、河北省唐山、广西省、海南省等地采样，取“空肠空胃”等症状的 172尾病虾的肝胰腺、肠道、血淋巴和患病仔虾进行细菌分离，分别涂布LB、TCBS、BHI等培养基并进行纯化，共收集1435株细菌。 采用传统微生物学鉴定方法、16S rDNA基因扩增、BIOLOG Gen Ⅱ/Gen Ⅲ Microstation自动微生物鉴定系统等方法，鉴定细菌941株，分别属于10个属，73种细菌。 人工感染 用副溶血弧菌V1、苏云金芽孢杆菌Z7、V1+Z7混合菌分别注射感染对虾，在感染后6天全部死亡，死亡率100%，表现典型肝胰腺坏死症状。对照组死亡率为12%，没有肝胰腺坏死症状。其中：鉴定有副溶血弧菌的对虾51尾，占鉴定对虾总数的52.6%；鉴定有蜡样芽胞杆菌的对虾27尾，占鉴定对虾总数的27.8%；鉴定有霍乱弧菌的对虾23尾，占鉴定对虾总数的23.7%；鉴定有嗜水气单胞菌的对虾19尾，占鉴定对虾总数的19.6%；鉴定有苏云金芽胞杆菌的对虾17尾，占鉴定对虾总数的17.5%；鉴定有金橙黄微小杆菌的对虾14尾，占鉴定对虾总数的14.4%；其他细菌也分别在不同尾虾中检出。HPNS不是有单一某种细菌所导致 抗性基因检测结果抗性基因strAfloRSul1Sul2gyrA第一批4525594080第二三批258233586合计80399584184百分比22.99%11.21%27.29%24.14%52.87% （3）病毒性病因分析 对虾WSSV、IHHNV、MBV、BP、TSV、YHV、IMNV等11中病毒检测和人工感染，证明HPNS不是由病毒所致。 （4）环境因素分析亚硝酸氮和氨氮对发病的影响亚硝酸氮 N均值（±SD)均值的 95% 置信区间显著性下限上限发病前4天到发病当天浓度最大值20497.160（±509.205）258.845735.475P=0.022没发病塘浓度最大值775.000（±95.1898）-13.036163.036发病前4天到发病当天浓度平均值20429.915（±414.543）235.903623.927P=0.025没发病塘浓度平均值718.486（±18.3561）1.50935.462 分别比较发病塘与没发病塘亚硝酸氮浓度最大值和平均值，通过单因素方差分析，P0.05,差异显著。结果表明，亚硝酸氮与发病具有密切关系。根据结果分析得亚硝酸氮对发病的阈值为：163ug/L~259ug/L。达到或者超过阈值，认为很可能诱发对虾发病。（5）饲料投喂量与对虾发病的关系在第40天，第50天，第70天的养殖时间点上，茂名示范点生病塘的当天平均投喂量都极显著（P＜0.01)的高于塘沽示范点各正常养殖塘。正常塘平均亩产557.36斤，发病塘平均亩产479.2斤。时间示范点样本量平均值（斤/万尾·亩）平均值（斤/亩）标准差显著性检验第40天投料量茂名（生病）172.6816.89 0.50816P=0.000　塘沽（正常）160.412.11 0.17549第50天投料量茂名（生病）173.3820.92 0.81227P=0.000　塘沽（正常）160.884.07 0.47407第70天投料量茂名（生病）73.8723.01 1.26945P=0.001　塘沽（正常）161.798.15 1.12595（5）停止投料对水体理化因子的影响 小结： 通过发病时减料前后水质浓度对比可知，饲料投喂量是影响水质因子的重要因素。 （6）放苗密度与对虾发病的关系单因素方差分析显示：在温州示范点，发病的养殖塘的平均放苗密度极显著的大于没发病的塘 （P=0.002﹤0.01）。样本量平均值(万尾/亩)标准差显著性检验正常143.8791.3180P=0.002生病36.8000.3464（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题珠海：发病前后水体细菌弧菌数量（1）1-6号塘发病后水体总菌弧菌数量下降，7-9号塘发病后水体总菌弧菌数量上升。（2）1-6号塘发病后采取换水、停料的措施，使得水体细菌弧菌数量下降。7-9号塘在台风雨天过后发病，结合藻类分析推测，由于阴雨天气导致藻类死亡，营养物质不能转化使得细菌弧菌数量上升，导致发病。珠海：发病前后虾体细菌弧菌数量 各塘发病后虾体总菌数量相比发病前有明显下降。说明发病前虾体细菌数量已经达到对虾不能承受的程度，而发病后，经过停料换水等处理，对虾体内的细菌数量有所下降。 结合藻类分析的数据，发现藻类数量低于正常养殖水体中藻类数量，珠海基地池塘生态系统并不完整，从而导致致病性细菌的大量繁生，最终导致对虾发病。海南：发病前后水体细菌弧菌数量海南：发病前后虾体细菌弧菌数量104、203塘，6月7号发病105塘，31号发病 海南养殖对虾虾体总菌弧菌数量较低，与珠海相比低2个数量级，结合理化因子分析，推测在藻类和益生菌的调控作用发挥到最大之后，氨氮等理化因子上升，池塘生态环境主要受到理化因子的胁迫。电白： 虾发病后水体总菌升高的有4口塘，下降的有11口塘；水体弧菌升高的有8口塘，下降的有7口塘。 结合气候和藻类检测情况，导致细菌升高的原因与降雨倒藻有关，停料等因素导致细菌数的下降。电白 虾发病后虾体总菌升高有6口塘，下降的有9口塘；虾体弧菌升高有7口塘，下降有8口塘。 结合气候和藻类检测情况，导致细菌升高的原因与降雨倒藻有关，停料等因素导致细菌数的下降。（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题发病前后，水体优势藻为微囊藻的占总发病池塘的57.1%，以颤藻为优势藻的池塘占了35.7%，以绿藻为优势藻的池塘占了21.4%，以卵囊藻、伪鱼腥藻和色球藻为优势藻的池塘各占了14.3%。以微囊藻、颤藻等有毒藻类为优势藻的池塘占总发病池塘的92.8%。 （一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题海南六口塘均在不同时候有不同程度的发病，其中102,104,202,203发病后几天内有所缓解，发病程度较轻，103,105发病几天后情况有所加重。对比发病前后各理化因子变化，得出，氨氮与发病情况相关性较大。海南此次养殖过程中只下过一场雨，对比下雨前后各态氮以及无机氮的变化，可以看出在降雨后一天氨氮，无机氮，硝态氮均明显上升（尤其是氨氮），这可能是由于阴雨天气带来的藻类大量死亡，对无机氮的吸收作用明显降低，同时对虾排泄物积累以及藻类死亡会分解出氨氮排放到池塘内，造成氨氮急剧上升。珠海台风影响下，藻类大量死亡，对无机氮吸收作用减弱，台风过后3天氨氮和无机氮总量均骤升。海南：控料后5天，水体营养盐输入稳定，氨氮总体呈现一个下降的态势，无机氮总体呈现稍微下降至稳定，控料五天后硝酸盐先下降后升高（后期升高部分主要是氨氮转化），控料过程中发病缓解，对虾状态逐渐变好，无机氮稳定且其中有害理化因子氨氮的逐渐转化为硝酸盐。海南 电白：天气变化对水体含氮量的影响 天气由晴转多云，水体三态氮升高；由多云转为降雨后，水体三态氮升高；由降雨转多云，水体三态氮均降低。淡水中非离子氨占氨态氮的百分比含量（换算表）From United States Environmental Protection Agency National Library Network温度和PH与非离子氨在氨态氮中的百分比含量成正相关一般海水(S = 34 , I = 0.7)中非离子氨占氨态氮的百分比含量（换算表）引自：邹玲媛,承宪成.??非离子氨(UIA)水质评价指标及换算方法[J].?水产科学.?2002(02)温度和pH与非离子氨在氨态氮中的百分比含量成正相关，且对比淡水换算表，盐度（离子强度）与非离子氨在氨态氮中的百分比含量成负相关电白：藻类数量和天气变化对pH变化值的影响 藻类数量升高，水体藻类总光合作用增强，水体早晚pH之差增大，藻类数量降低，藻类总光合作用降低，水体早晚pH之差减小。 天气由晴天转阴雨天，藻类光合作用降低，水体早晚pH之差减小，由阴雨天气转多云，藻类光合作用增强，水体早晚pH之差增大。实际上，对虾池塘藻类、条件致病菌和营养盐（含氨氮、亚硝酸盐）之间发生了三个“级联效应”：1、第一“级联效应”：气候变化（台风、温度剧变、阴雨等），藻类大量死亡 —— 营养盐增加+池底腐败—— 水体细菌（含弧菌）数量增加——条件致病菌胁迫；2、第二“级联效应”：长周期的天气晴朗温度适合的情况下，容易产生老化藻类和老化益生菌（非功能性藻类和非功能性益生菌）——造成有害理化因子、有毒藻类和条件致病菌的胁迫。 3、第三个“级联效应”：功能性藻类、功能益生菌和理化调节剂等发挥最大功能——池塘营养盐无法有效消减——造成有害理化因子胁迫和有毒藻类的胁迫。维持池塘生态系统功能性藻类和功能性益生菌状态、消减池塘水体和池底营养盐和有害理化因子、提高池塘生态系统抗环境胁迫能力等，控制生态系统“级联效应”成为对虾健康的核心关键技术。 广东主要对虾养殖地区常年基本气候分析对广东主要对虾养殖地区2014年和2013年常年气候进行统计分析，具体结果如下：湛江地区2013年4月-9月期间月阴雨天气超过15天，2014年9天左右；珠海地区2013年4月-9月期间月阴雨天近20天，2014年近17天；茂名地区2013年4月-9月期间月阴雨天超过20天，2014年超过17天。总体来说，粤西和珠江三角州地区对虾主要养殖时间阴雨天超过15天，在此条件下，需要精细的池塘调控技术。在茂名基地养殖池塘开展了采取不同消毒方式后细菌的变化研究：（1）二溴海因 ；（2）二溴海因+沸石粉 图 二溴海因处理前后水体总菌数变化 图 二溴海因处理前后水体弧菌数变化 图 二溴海因+沸石粉处理前后总菌数变化图 二溴海因+沸石粉处理弧菌数变化（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题 肝胰腺坏死症发生的根本原因 对虾肝胰腺坏死症发生的直接原因： 条件致病菌、有害理化因子和有毒藻类三类因子harmful microalgae, pathogens, ammonia, nitriate, 根本原因：—— 养殖生态系统紊乱，生态系统抗应激能力弱，不能有 效控制条件致病菌和有毒藻类的发生；—— 单位时间内养殖量超过了环境容纳量，有毒理化因子 不能被消除。 3、对养殖池塘条件致病菌、有毒藻类和有害理化因子检测结果分析，发现对 虾养殖过程可以分为早期生态系统、中期生态系统和晚期生态系统。对虾养殖过程可以分为早期生态系统、中期生态系统和晚期生态系统。1、早期生态系统（培水期和对虾大量摄食饲料期，约30天）池塘营养盐缺乏：虾苗摄食习性：——不足于时有益藻类和益生菌持续调控生态系统的功能；——不足于抑制条件致病菌和有毒藻类的产生；——虾苗摄食底质腐败的有机物（死亡藻类等）这是对虾养殖早期发生HPNS的根本原因。 2、中期生态系统（约养殖20天至70天）营养盐大量输入，容易产生老化的藻类和益生菌：—— 随着营养盐的大量输入，老化藻类和老化益生菌（非功能性藻类和益生菌）过多，失去了生态系统调控功能，生态系统紊乱；—— 在环境胁迫条件下老化藻类和益生菌大量死亡，不但不能抑制有毒藻类和条件致病菌的发生，而且起到有害的作用。—— 中期生态系统决定了对虾养殖容纳量这是对虾养殖中期发生HPNS的根本原因。（3）晚期生态系统（约养殖70天以后）营养盐的输入大于有益藻类吸收和益生菌的转化能力：—— 有益藻类和益生菌作用达到最大值；—— 仅依靠有益藻类调控和益生菌调控已经不能维持健康生态系统；—— 有害理化因子升高.这是为什么目前对虾养殖难以超过80天的原因所在。初步建立了对虾肝胰腺坏死症生态防控技术1、池塘清理2、培水3、种苗密度4、种苗病原检测5、养殖周期6、饵料投喂控制7、测水调水8、有毒藻类监控与调控9、条件致病菌监控与处理10、肝胰腺坏死症控制技术对虾肝胰腺坏死症（HPNS）防控技术手册（三）示范效果 —— 2014年第一造，在广东和海南选择三个地点进行了技术示范，共118口池塘，养殖时间超过90天，114口池塘养殖成功，养殖成功率超过94%。—— 养殖成功池塘平均产量超过1000斤/亩。—— 同期同区域养殖对虾超过90天成功率不超过40%。 如何判定藻类和益生菌老化 —— 水体起泡沫，藻类大量死亡—— 昼夜水体pH变化小于0.6—— 早晨在池塘下风口可以闻到异味—— 岸基物体倒影不清晰—— 显微镜观察，藻类活动力弱 在藻相和气候好的情况，为什么要周期性“抗应激-消毒-底质改良-培水+益生菌《水保王》”处理水体 —— 在生态系统中，在气候良好的情况下，由于藻类密度胁迫，藻类不再生长，失去了吸收营养盐的能力，此时的藻类应该是功能性较差，需要轻度消毒清除老化藻类。—— 消毒可以杀灭大部分的条件致病菌和老化的益生菌。—— 消毒对对虾而言是胁迫，对虾会产生应激，在消毒前需要使用Vc和葡萄糖酸钙处理—— 处理后2-4小时可以消毒处理。—— 消毒处理后，改良底质；—— 消毒24小时，重新培水，加快新生藻类的繁殖生长，发挥藻类消除营养盐的功能和水保王（新生益生菌）转化有害物质的能力。—— 重新构建高效的维持平衡的生态系统。 阴雨天为什么要减料或停料 —— 阴雨天藻类不能充分发挥消除池塘水体营养盐的功能—— 按照传统的投喂技术（根据前一次饵料的摄食情况），池塘水体营养盐增加，而藻类又不能完全清除，氨氮、亚硝基氮升高，也减弱了藻类对条件致病菌的抑制作用，增加池塘底部的胁迫，打破了池塘生态系统平衡—— 减少饵料的投喂或停止投喂，可以维持养殖生态系统的稳定为什么要在天气变化前4天养殖水体开始“抗应激-消毒-底质改良-培水+《水保王》”处理 —— 新生藻类和水保王的益生菌抵抗气候变化的能力强，具有比较强的维持生态系统平衡的能力 。—— 老化和半老化的藻类和原来的益生菌抵抗气候变化（暴雨、急剧升温、急剧降温等）的能力弱，容易发生倒藻，藻类不但起不到调节水质的作用，反而使水质变坏。—— 需要看4天的天气预报。—— 第一天，用《得益》拌料或发酵饲料（一般需要36小时至48小时）—— 第二天抗应急处理，消毒，底质改良—— 第三天培水和培养益生菌—— 第四天新生藻类和水保王的益生菌大量繁生，生态系统具有比较强的抗胁迫能力。 配合减料或停料。关于养殖容纳量 —— 养殖对虾需要上市规格，需要时间—— 养殖对虾密度和对虾品种决定了每天的营养盐输入量—— 藻类和益生菌最大功能决定了对虾粪便等所产生的营养盐量—— 因此，养殖的关键是要使中期生态系统不要过早的进入晚期生态系统，这与种苗密度、品种、养殖管理有关。—— 因此固定的养殖模式养殖容纳量是一个相对定量，一般情况下，封闭式养殖模式（养殖期只进水不排水），养殖90-100天产量约1000斤/亩/造。每交换1池塘水，养殖凡纳滨对虾会增加约300斤/亩。关于生长快的种苗与普通种苗 —— 相同密度，养殖至中、后期（40-50天）营养盐的投入量生长快种苗池塘约是生长慢种苗池塘的2倍，中期生态系统会过早的进入晚期生态系统。—— 如在封闭式养殖模式中，投放5万尾虾苗/亩，养殖50左右天投喂饵料约800-1000斤，而普通虾苗约300斤。—— 生长快的对虾密度大，中期生态系统的稳定很难维持。对虾养殖过程三个生态系统模式图关于停料和减料—— 在封闭式养殖模式中，养殖100天，完全停料14天，每天投喂1次23天，投喂和2次9天，停料和减料时间46天，一天正常投喂54天。—— 一次停料3天，对对虾生长没有太大的影响—— 停料和减料的原则1、大雨停料2、阴天和小雨减料3、降温停料或减料4、pH变化低于0.6停料或减料5、发生肝胰腺坏死症停料6、水体有泡沫或有异味7、倒藻谢 谢 ！请批评指正！红色字体是我们实验室在凡纳滨对虾中已经克隆和报道的，灰色字体是尚未在对虾中报道的。