pcr实验室建设标准.pdf-深圳网站优化推广公司

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临床基因扩增实验又称 PCR 实验,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽 疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。 它可以通过将病毒体内所含的基因进行 扩增的方法, 测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。 由于该 检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、 特异性高、快捷、 对样品要求低等优点, 因此被临床医生广为认可, 已广泛应用于医院的临床诊断 和各防疫检测部门的禽疫病诊断。 但是, 这种实验需要有能保证绝对安全、 配置 合理的实验室和非常规范的操作为前提。 近年来对临床基因扩增检验实验室的建 设越来越得到重视, 因为它对检测结果的可靠性、 准确性和安全性起到至关重要 的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局,空调通风系统设计、 气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述。 临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。 因此,实验室的 平面布局、空调通风 系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下 面就对这几个方面分别进说明。 二、 PCR 实验室平面布局 临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、 标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、 扩增产物分析区。 为避免交叉污染, 进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行, 即只能从试剂贮存和准备区→标 本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。 三、实验室空调通风系统设计及压力控制 PCR 实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可 能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保 证各实验区的压力要求。 1、试剂贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制 备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区, 不得经过其他区域。 试剂原 材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。 对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。 2 、标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸 (RNA 、DNA) 提取、贮存及其 加入至扩增反应管和测定 RNA 时 cDNA 的合成。 本区的压力梯度要求为: 相对于邻近区域为正压, 以避免从邻近区进入本区的气 溶胶污染。 另外, 由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染, 所以应避免 在本区内不必要的走动。 3 、扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为 DNA 或 cDNA 扩增。此外,已制备的 DNA 模板和合 成的 cDNA( 来自样本制备区 ) 的加入和主反应混合液 ( 来自试剂贮存和制备区 ) 制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式 PCR 测定中,通常在第一轮扩 增后必须打开反应管, 因此巢式扩增有较高的污染危险性, 第二次加样必须在本 区内进行。 本区的压力梯度要求为: 相对于邻近区域为负压, 以避免气溶胶从本区漏出。 为 避免气溶胶所致的污染, 应尽量减少在本区内的不必要的走动。 个别操作如加样 等应在超净台内进行。 4 、扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。 如使用全自动封闭分析仪器检测, 此 区域可不设。 本区是最主要的扩增产物污染来源, 因此对本区的压力梯度的要求为: 相对于邻 近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。 四、污染的
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